实验原理
石蜡切片是组织学常规切片技术中最广泛使用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学、法医学等学科研究、观察和判断细胞组织形态变化的主要方法,在许多其他学科中也得到了广泛应用。
实验流程
第一步:取材与固定
- 材料选择时须尽可能不损伤所需要的部分,动物组织取材建议灌流后取材,冲去过多血液
- 取材后,用PBS清洗后放入固定液浸泡12-24小时(特殊组织需延长固定时间)
- 切取材料时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤
- 切取的材料应小而薄,便于固定剂迅速渗入内部(一般厚度不超过2mm,大小不超过5x5mm²,约黄豆粒大小)
第二步:脱水
- 固定完成后准备脱水,将固定好的组织取出,去除多余的毛发、脂肪等杂质,并修出一个平面,让组织防止更稳定
- 将组织依次放入不同浓度的乙醇中脱水
- 从75%乙醇开始,依次放入75%、85%、95%无水乙醇脱水各60分钟,再依次放入两个100%无水乙醇,脱水之后进行透明,将组织依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各6分钟
第三步:浸蜡
- 透明后 将组织块依次放入:软蜡Ⅰ、软蜡Ⅱ、硬蜡。
- 软蜡Ⅰ、软蜡Ⅱ各30分钟。
- 硬蜡 1小时。
第四步:包埋
- 浸蜡完成后,将熔化蜡倒入包埋盒,迅速用镊子夹取组织块,切面朝下放入盒的中央位置,待石蜡全部凝结变硬即可取出。
睦科生物简介
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