1.细菌污染的特征

细菌污染是细胞培养中最常见的污染，其污染主要来源于实验室环境、实验人员、实验服、实验耗材、共用试剂等，甚至在细胞培养过程中添加双抗，也经常因为操作不慎而引起污染。

很多实验人员容易将细菌和“黑胶虫”区分不清，极易造成污染种类判断错误而“延误病情”，“黑胶虫”是一种常见的细胞污染物，与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡。目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大地影响。

“黑胶虫”污染与细菌污染最明显的一个差别就是：“黑胶虫”污染的培养基不浑浊，在显微镜下观察，细胞周围和培养液中有“黑胶虫”呈现布朗运动。细菌污染在1~2后会出现浑浊、PH下降变黄，污染初期培养基肉眼观察无明显改变，只有在倒置显微镜下仔细观察才能发现在培养基内“一穿而过”的细菌，所以需要实验员每天细心观察才能及时发现细菌污染，一般细菌污染进程很快，有的细胞在培养箱过夜后肉眼就能显著观察到浑浊，在显微镜下可以观察到黑点在培养基内游动，细胞变圆或者崩溃，从壁上脱落死亡。

细菌污染爆发图片

2.清除细菌污染操作规程

从-20℃冰箱内取出细菌清除剂，将试剂管瞬时离心（3000rpm，3~5s）后放置于EP管架上，用75%的酒精喷洒试剂管的表面，在生物安全柜中进行无菌操作；

以T25细胞培养瓶为例

对于培养基中有偶有黑点穿过但未见明显浑浊的细胞，处于细菌污染初期，需要立即更换为含有细菌清除剂的完全培养基，通常推荐使用的稀释倍数为2000×，如：6mL的完全培养基加入3μL的细菌清除剂混匀，连续加药培养1~2周即可有效清除细菌污染。

对于培养基突然变黄并明显沙化浑浊的细胞，此时细菌污染已非常严重，需要酌情增加药物浓度以提高清除细菌的效率，建议提高至1000×浓度进行清除，如：6mL的完全培养基加入6μL的细菌清除剂混匀。每天换液两次，建议上午进入实验室进行一次加药培养基换液，下午离开实验室之前进行一次加药培养基换液，第二天和第三天重复此过程，第四天开始即可每天换液一次，连续加药培养1~2周（或传代3次）后，无菌检测判断是否还存在细菌污染。