做过WB实验的同学都知道，除了目的蛋白之外，我们同时还需展示另一个重要蛋白的数据，那便是——内参。
内参，即 内部参照（Internal Control） 。它是我们WB实验过程中很重要的一个参考系。 通过内参结果，我们可以判断：1）实验流程和操作是否正常；2）实验中各组样本上样量是否一致；3）目标蛋白的表达水平是否存在差异。因此内参还被称为 上样参照（Loading Control）。
一、 内参选择原则
内参的种类很多，其中包含全细胞或胞浆内参、膜内参、核蛋白内参等，比如β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等，下面简单介绍下选择内参应遵循的原则：
1. 样本种属来源：首先考虑实验样本来源于何物种。 a、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3等。b、其他稀少物种来源，可以参照文献指导或是选择高度保守管家基因表达的蛋白作为内参。
2. 目的蛋白分子量：选择内参时，应该考虑目的蛋白分子量的大小，通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5kDa以上，但勿差距太大。比如目的蛋白分子量为45kDa，此时不适宜选择β-actin 作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。
3. 目的蛋白表达部位：针对一般蛋白质检测，GAPDH、β-actin 或β-tubulin可以满足要求，而如果需要检测亚细胞器蛋白时，适宜选择对应亚细胞器内参更能体现内部参照的准确性。比如常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、TBP、YY1、Histone H3。而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为ATP1A1。对于线粒体蛋白的检测，常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。
以上原则仅针对通常情况，需要特别注意的是内参的选择还须考虑实际实验环境状况，比如某些细胞或组织由于缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达量增高，此种状况下GAPDH不适合做内参；在涉及细胞增殖相关实验中，c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参；在凋亡实验中，TBP、Lamin等不适合作为核内参。因此在设计实验方案时应考虑这些因素的影响并查询相关文献，如果在实验过程中出现内参表达出现异常状况应及时分析原因并调整内参选择。
二、 常用内参展示
常用的内参种类很多，其中GAPDH、Actin和Tubulin是最常用的三个，他们就是上面提到的“管家蛋白”，在几乎所有的哺乳动物细胞中均有高表达，是最常用的胞浆或全细胞内参：
1. GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶），分子量约为36kDa。
2. β-Actin（β-肌动蛋白），分子量约为42kDa。
3. α-Tubulin（α-微管蛋白），分子量约为50-55kDa。
在进行亚细胞器蛋白检测时，适宜选择对应亚细胞器内参更能体现内部参照的准确性。常用的有：
4. Lamin B1（核纤层蛋白 B1），分子量约为66-72kDa，常用作核膜内参。
5. Histone-H3（组蛋白 H3），分子量约为15-17 kDa，常用作 核内参 勘误：（货号应为：68345-1-Ig）
6. ATP1A1（钠/钾离子转运ATP酶α1肽），分子量约为97-110 kDa，常用作膜内参。
7. COX4I1（细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ亚型1），分子量约为17-20kDa，常用作线粒体内参。
除此之外，在检测全血/血浆/血清样本时，也会用到一些内参蛋白，比如Transferrin和Albumin。
8. Transferrin（转铁蛋白），分子量约为77kDa，可作为全血/血浆/血清内参蛋白。
当然，以上并不是全部，还有很多靶标可以作为各种样本的内参蛋白，篇幅有限，这里就不做更多展示了，文末我们会进行一个表格式的汇总，值得收藏！
三、 Proteintech内参抗体优势
明确了内参蛋白，下一步就是要挑选适合的内参抗体了。
那作为专注免疫学领域20+年抗体应用专家，咱们Proteintech家的内参抗体又有哪些值得你心动的地方呢？
1. 内参种类齐全
Proteintech可提供针对各类样本的全套内参靶标抗体，不管是胞浆/全细胞，或是核、膜、线粒体等亚细胞结构，亦或是全血/血浆/血清样本，Proteintech均可提供配套的内参抗体；并且针对同一个靶标，我们还可提供兔多抗、鼠单抗、重组兔单抗等多种选择，全方位满足实验需求。
2. 超高稀释比
在WB应用中，Proteintech的大部分内参抗体稀释比可以达到1:10000，部分能达到1:100000，其中GAPDH鼠单抗（货号：60004-1-Ig）推荐稀释比更是高达1:50000-1:500000，可谓是骇人听闻！一支50ul的小包装，最高可配置25L抗体工作液！（数学好的同学帮忙算算这支抗体可以用多久~>_<）
3. 超多文献引用
如果说以上的陈述都是小P单方面的陈述，接下来的这个数据绝对客观、可靠、且令人震撼！
据第三方平台CiteAb数据统计，GAPDH鼠单抗（货号：60004-1-Ig）目前已被全球科学家引用8138次！也是目前全球被引用最多的一支GAPDH抗体。
除此之外，GAPDH兔多抗（货号：10494-1-AP）被引 4875 次；β-Actin鼠单抗（货号66009-1-Ig）被引 4494 次；β-Actin兔多抗（货号：20536-1-AP）被引 2582 次；α-Tubulin兔多抗（货号：11224-1-AP）被引 1070 次；α-Tubulin鼠单抗（货号：66031-1-Ig）被引 726 次；β-Tubulin兔多抗（货号：10094-1-AP）被引 644 次；Lamin B1兔多抗（货号：12987-1-AP）被引 837 次；PCNA兔多抗（货号：10205-2-AP）被引 713 次；Histone-H3兔多抗（货号：17168-1-AP）被引 683 次......
数万科学家的选择，数万项目的真实案例验证，充分佐证了Proteintech抗体的优质可靠。
4. 看到这里，还没有对Proteintech的内参抗体心动吗？如果您还有什么顾虑，或者还想了解更多信息，可直接登陆Proteintech中文官网（www.ptgcn.com）查询。
最后，附上小P精心整理的 内参抗体推荐列表 ，大家可以根据上述的内参抗体选择原则，挑选最适合自己实验条件的内参抗体。 （温馨提示：表格中部分产品SCI引用数量偏少，主要原因在于产品上线时间晚。其产品质量与高引抗体一致，二者均在同样严格的质检标准中生产上线。）
所以回到标题中的问题：内参抗体怎么选？
小P的答案是：选Proteintech就对啦！
最后的最后，祝愿所有Proteintech的伙伴们，都能 实验顺利，早日发文！
笔芯 ~ ♥
